Производи

Протеинската фосфорилација ги регулира различните клеточни функции и игра клучна улога во раниот развој на растенијата.За да ги надополниме и прошириме претходните испитувања за фосфорилација на протеини во садници на Arabidopsis, користевме алтернативен пристап кој комбинира екстракција на протеини во услови кои не се денатурираат со имобилизирана метал-јонска афинитетна хроматографија (IMAC) збогатување на непроменети фосфопротеини во екстракти осиромашени од Рубиско, проследено со идентификација користејќи дводимензионална гел електрофореза (2-DE) и течна хроматографија-тандем масена спектрометрија (LC-MS/MS).Дигестијата на трипсин во гел и анализата на избраните гел-дамки идентификуваа 144 фосфорилирани пептиди и остатоци, од кои само 18 фосфопептиди и 8 фосфозити беа пронајдени во базите на податоци на локацијата за фосфорилација PhosPhAt 4.0 и P3DB Arabidopsis thaliana.Повеќе од половина од 82 идентификувани фосфопротеини биле вклучени во метаболизмот на јаглени хидрати, фотосинтезата/дишењето или sms механизмот за одговор на оксидативен стрес.Се чини дека збогатувањето на непроменети фосфопротеини пред 2-DE и LC-MS/MS го подобрува откривањето на фосфорилираните остатоци од треонин и тирозин во споредба со методите кои користат збогатување на ниво на пептид, што сугерира дека двата пристапа се донекаде комплементарни во однос на покриеноста на локацијата на фосфорилација.Споредувајќи ги резултатите за млади садници со оние добиени претходно за зрели листови од Arabidopsis, идентификувани се пет протеини кои се диференцијално фосфорилирани во овие ткива, покажувајќи го потенцијалот на оваа техника за истражување на динамиката на фосфорилацијата на протеините за време на развојот на растението.