Производи

Начинот на кој ефектите од симултаните мутации се комбинираат за да ја променат ензимската активност не е лесно предвидлив бидејќи овие ефекти не се секогаш адитивни на линеарен начин.Оттука, карактеризацијата на ефектите на симултаните мутации на остатоците од аминокиселини кои го врзуваат супстратот може да даде значаен придонес во разбирањето на специфичноста на супстратот на ензимите.Во бета-гликозидазата од Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), обата резидуи Q39 и E451 комуницираат со супстратот и тоа е од суштинско значење за дефинирање на специфичноста на супстратот.Двојните мутанти на Sfbetagly (A451E39, S451E39 и S451N39) беа подготвени со мутагенеза насочена кон локацијата, изразена во бактерии и прочистена со помош на афинитетна хроматографија.Овие ензими беа карактеризирани со користење на р-нитрофенил бета-галактозид и р-нитрофенил бета-фукозид како супстрати.Односот k мачка/Km за единечни и двојни мутанти на Sfbetagly кои содржат мутации насочени кон локацијата на позициите Q39 и E451 беше искористен за да се покаже дека ефектот врз слободната енергија на ESdouble кама (комплекс на ензимска транзиција) на двојните мутации (Gdouble daggerxy) не е збир на ефектите што произлегуваат од единечните мутации (Gdouble daggerx и Gdouble daggery).Оваа разлика во Gdouble кама покажува дека ефектите од единечните мутации делумно се преклопуваат.Оттука, овој заеднички ефект се брои само еднаш во Gdouble daggerxy.Кристалографските податоци за бета-гликозидазите откриваат присуство на бидентатна водородна врска која ги вклучува остатоците Q39 и E451 и истата хидроксилна група на подлогата.Затоа, и термодинамичките и кристалографските податоци сугерираат дека остатоците Q39 и E451 имаат взаемно влијание врз нивните соодветни интеракции со подлогата.