Производи

Слично на другите РНК вируси со позитивна нишка, томбусвирусите се реплицираат со мембрански врзан вирусен репликазен комплекс (VRC).VRC се состои од РНК-зависна РНК полимераза (RdRp) кодирана од вирусот p92 (РНК полимераза) (RdRp), вирусниот p33 РНК шаперон и неколку кооптирани протеини домаќини.Со цел да стане функционален RdRp по неговото преведување, протеинот за репликација p92 треба да се инкорпорира во VRC, проследено со негово активирање.Претходно покажавме во анализата базирана на екстракт од квасец без клетки дека активирањето на вирусот на каскадери со грмушки домати (TBSV) RdRp бара растворлив фактор(и) домаќин.Во овој напис, го идентификуваме клеточниот топлински шок протеин 70 (Hsp70) како кооптиран фактор домаќин потребен за активирање на N-терминално скратениот рекомбинантен TBSV RdRp.Дополнително, блокирањето на функцијата на Hsp70 базирано на мали молекули ја инхибира синтезата на РНК од страна на томбусвирусот RdRp ин витро.Понатаму, покажуваме дека неутралните фосфолипиди, имено, фосфатидилетаноламин (PE) и фосфатидилхолин (PC), ја подобруваат активацијата на RdRp ин витро.Спротивно на тоа, фосфатидилглицеролот (PG) покажува силен и доминантен инхибиторен ефект врз ин витро активирањето на RdRp.Ние, исто така, демонстрираме дека PE и PC ја стимулираат интеракцијата на RdRp-вирусна плус-влакна RNA [(+)RNA], додека PG го инхибира врзувањето на вирусната РНК со RdRp.Врз основа на стимулативните наспроти инхибиторните улоги на различните фосфолипиди во активирањето на RdRp на томбусвирус, предлагаме дека липидниот состав на целните субклеточни мембрани може да се искористи од томбусвирусите за регулирање на новиот состав на VRC за време на инфекцијата. РНК полимераза зависна од вирусот (RdRp), кој е одговорен за синтетизирање на потомството на вирусна РНК во заразените клетки на неколку РНК вируси со позитивна нишка, првично е неактивен.Оваа стратегија најверојатно ќе ја избегне синтезата на вирусна РНК во цитозолот што брзо би довело до индукција на клеточни антивирусни реакции предизвикани од РНК.За време на склопувањето на комплексот репликазен врзан за мембрана, вирусниот RdRp се активира преку нецелосно разбран процес што го прави RdRp способен за синтеза на РНК.Со користење на TBSV RdRp, покажуваме дека избраниот клеточен Hsp70 шаперон и неутралните фосфолипиди го олеснуваат активирањето на RdRp ин витро.Спротивно на тоа, фосфатидилглицеролот (PG) има доминантен инхибиторен ефект врз ин витро активирањето на RdRp и RdRp-виралната РНК интеракција, што сугерира дека мембранозниот микродомен кој го опкружува RdRp во голема мера влијае на неговата способност за синтеза на РНК.Така, активирањето на вирусниот RdRp најверојатно зависи од повеќе компоненти на домаќинот во инфицираните клетки.