Производи

Нов тест со течна хроматографија со високи перформанси за гликозилтрансферази врз основа на дериватизација со антранилна киселина и детекција на флуоресценција.

Анализите беа развиени со помош на уникатната хемија за означување на 2-аминобензоева киселина (2AA; антранилна киселина, АА) за мерење на активностите на β1-4 галактозилтрансфераза (GalT-1) и α2-6 сиалилтрансфераза (ST-6) со течност со високи перформанси хроматографија (HPLC) со детекција на флуоресценција (Anumula KR. 2006. Напредоци во методите на дериватизација на флуоресценција за течна хроматографска анализа со високи перформанси на гликопротеинските јаглехидрати. Anal Biochem. 350:1-23).N-ацетилглукозамин (GlcNAc) и N-ацетиллактозамин беа користени како акцептори и уридин дифосфат (UDP)-галактоза и цитидин монофосфат (CMP)-N-ацетилневраминска киселина (NANA) како донатори за GalT-1 и ST-6, соодветно.Ензимските производи беа означени in situ со АА и беа одвоени од подлогите на колоната TSKgel Amide 80 користејќи услови во нормална фаза.Ензимските единици беа определени од областите на врвот со споредба со истовремено дериватизираните стандарди Gal-β1-4GlcNAc и NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Беше утврдена линеарност (време и ензимска концентрација), прецизност (интра- и интересеј) и репродуктивност за анализите.Утврдено е дека анализите се корисни за следење на ензимските активности за време на изолацијата и прочистувањето.Анализите беа високо чувствителни и беа изведени еднакви или подобри од традиционалните мерења базирани на радиоактивен шеќер.Форматот на анализа може да се користи и за мерење на активноста на други трансферази, под услов акцепторите на јаглени хидрати да содржат редукционен крај за означување.Развиена е анализа за акцептори на гликопротеини со користење на IgG.Беше развиен краток метод на ХПЛЦ профилирање за раздвојување на IgG гликаните (двоентенарни G0, G1, G2, моно- и дијалилизирани), што го олесни одредувањето на GalT-1 и ST-6 активностите на брз начин.Понатаму, овој метод на профилирање треба да се покаже корисен за следење на промените во IgG гликаните во клинички услови.