Производи

Мембранската топологија на доменот на каналот на колицин Е1 беше проучена со пренос на енергија со флуоресцентна резонанца (FRET).FRET вклучува генетски кодирана флуоресцентна амино киселина (кумарин) како донатор и селективно означен цистеински остаток врзан со DABMI (4-(диметиламино) фенилазофенил-4'-малеимид) како FRET акцептор.Флуоресцентниот кумарин остаток беше инкорпориран во протеинот преку ортогонален пар tRNA/аминоацил-tRNA синтетаза што овозможи селективно инкорпорирање во кое било место во доменот на каналот на колицин.Секоја варијанта имаше стоп (TAG) мутација за инкорпорирање на кумарин и мутација на цистеин (TGT) за прицврстување DABMI.Шест меѓуспирални растојанија во спиралите 1-6 беа одредени со користење на FRET анализа и за растворливите и за состојбите поврзани со мембраната.Податоците FRET покажаа големи промени во меѓуспиралните растојанија меѓу спиралите 3-6 по асоцијацијата на мембраната, обезбедувајќи нов увид во структурата врзана со мембраната на доменот на каналот.Општо земено, интерхеличните ефикасности на кумарин-DABMI FRET се намалија при врзување на мембраната, градејќи се врз моделот на чадор за каналот на колицин.Беше развиен пробен модел за затворена состојба на доменот на каналот врз основа на тековните и претходно објавените податоци FRET.Моделот сугерира кружно распоредување на спиралите 1-7 во насока на стрелките на часовникот од екстрацелуларната страна и мембранската интерфајсна асоцијација на спиралите 1, 6, 7 и 10 околу централната трансмембранска фиба формирана од спиралите 8 и 9.