Производи

Протеинот ORF45 на Капошиевиот херпес вирус (KSHV) поврзан со сарком е специфичен за гамахерпесвирус непосредно-ран тегументен протеин.Нашите претходни студии ги открија неговите клучни улоги и во раните и доцните фази на KSHV инфекцијата.Во оваа студија, го испитавме интерактомот на ORF45 користејќи панел од моноклонални антитела.Во прилог на претходно идентификуваните екстрацелуларно регулирани киназа (ERK) и p90 рибозомални S6 киназа (RSK) протеини, најдовме неколку други копрочистени протеини, вклучувајќи ги и истакнатите од ~38 kDa и ~130 kDa.Масовната спектрометрија откри дека протеинот од 38 kDa е вирусен ORF33, а протеинот од 130 kDa е клеточен USP7 (убиквитин специфична протеаза 7).Го мапиравме доменот за врзување на ORF33 со високо конзервираните карбоксил-терминални 19 амино киселини (аа) на ORF45 и доменот за врзување USP7 на пријавениот консензус мотив во централниот регион на ORF45.Користејќи боење со имунофлуоресценција, забележавме колокализација на ORF45 со ORF33 или USP7 и под трансфектирани услови и во клетки инфицирани со KSHV.Покрај тоа, забележавме релокализација зависна од ORF45 на дел од ORF33/USP7 од јадрото до цитоплазмата.Откривме дека ORF45 предизвика зголемување на акумулацијата на протеинот ORF33 што беше укината ако се избрише доменот што врзува ORF33 или USP7 во ORF45.Понатаму, бришењето на конзервираниот карбоксилен крај на ORF45 во геномот на KSHV драстично го намали нивото на протеинот ORF33 во клетките инфицирани со KSHV и го укина производството на потомци вириони.Колективно, нашите резултати не само што откриваат нови компоненти на интерактомот ORF45, туку и демонстрираат дека интеракциите меѓу овие протеини се клучни за литичката репликација на KSHV. Херпесвирусот на Капоши асоциран со сарком (KSHV) е предизвикувачкиот агенс на неколку човечки карциноми.KSHV ORF45 е мултифункционален протеин кој е потребен за KSHV литичка репликација, но точните механизми со кои ORF45 ги извршува своите критични функции се нејасни.Нашите претходни студии открија дека целиот ORF45 pr otein во клетките постои во комплекси со висока молекуларна тежина.Затоа, се обидовме да го карактеризираме интерактомот на ORF45 за да обезбедиме увид во неговите улоги за време на литичката репликација.Користејќи панел од моноклонални антитела, го испитавме интерактомот на ORF45 во клетките инфицирани со KSHV.Идентификувавме два нови сврзувачки партнери на ORF45: вирусниот протеин ORF33 и клеточната убиквитин специфична протеаза 7 (USP7).Понатаму покажуваме дека интеракцијата помеѓу ORF45 и ORF33 е клучна за ефикасното производство на KSHV вирусни честички, што сугерира дека насоченото мешање со оваа интеракција може да претставува нова стратегија за инхибирање на литичката репликација на KSHV.