Производи

Еукариотските клетки содржат деликатна рамнотежа на минутни количини на четири деоксирибонуклеозидни трифосфати (dNTPs), доволни само за неколку минути репликација на ДНК.И недостатокот и вишокот на еден dNTP може да резултира со зголемени стапки на мутации, погрешна поправка на ДНК или исцрпување на митохондријалната ДНК.dNTP обично се квантифицираат со ензимска анализа во која инкорпорирањето на радиоактивен dATP (или радиоактивен dTTP во анализата за dATP) во специфични синтетички олигонуклеотиди со ДНК полимераза е пропорционално на концентрацијата на непознатиот dNTP.Откривме дека најчесто користената Klenow DNA полимераза може да го замени соодветниот рибонуклеотид за непознатиот dNTP што во некои случаи води до големо преценување на dNTP.Сега ги опишуваме условите за анализа за секој dNTP кои избегнуваат инкорпорирање на рибонуклеотид.За dTTP и dATP анализите, доволно е да се минимизираат концентрациите на ензимот Klenow и на означениот dATP (или dTTP);за dCTP и dGTP моравме да го замениме ензимот Klenow или со Taq DNA полимераза или со Thermo Sequenase.Предлагаме дека во некои претходни извештаи инкорпорацијата на рибонуклеотид може да предизвика премногу високи вредности за dGTP и dCTP.