Производи

За конкретно квантифицирање на неколку метаболити на 5-флуороурацил (5-FU) и два ендогени монофосфатни нуклеотиди, развивме оригинален метод базиран на течна хроматографија-тандем масена спектрометрија (LC-MS/MS).Оваа анализа овозможи определување на: (i) интрацелуларното производство на 5-флуоро-2'-деоксиуридин-5'-монофосфат (5-FdUMP) од 5-FU или 5-флуоро-2'-деоксиуридин (5-FdUrd) , (ii) влијанието на концентрацијата на 5-FdUMP врз односот на интрацелуларниот 2'-деоксиуридин-5'-монофосфат (dUMP)/тимидин-5'-монофосфат (TMP), и (iii) степенот на секреција на 5-FdUMP и 5-FU од човечки култивирани клетки со ABC транспортери.Под нашите експериментални услови, клетките беа инкубирани со 5-FU или 5-FUrd.Потоа, клеточните протеини беа преципитирани со метанол.Оваа постапка обезбеди високо обновување на екстракција.Дополнително, за мерење на секрецијата на 5-FU и 5-FdUMP од клетките, извршивме квантификација на овие молекули во медиумот за култура.Медиумите беа или директно инјектирани (5-FU) или беа под екстракција на цврста фаза со помош на кертриџ за екстракција на восок Oasis (5-FdUMP).Одвојувањето на аналитите беше изведено на колона dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) со изократски режим со користење на амониум формат пуфер/метанол/вода (5/5/90, v/v) како мобилна фаза.Времето на работа не надминуваше 6,2 мин.Аналитите беа јонизирани во интерфејс со електропрскање под режим на негативен јонски режим.Ние го потврдивме методот во опсег од 2,5-150 ng mL -1 според соединенијата.Варијабилноста во и меѓу анализите беше помала од 10% во текот на седум дена.Сите соединенија беа стабилни во клетките или во медиумот за култура кога примероците беа складирани на -20 °C најмалку две недели и по три циклуси на замрзнување-одмрзнување.Не беше забележан ефект на матрица во двата медиума.