Производи

Моногалактопиранозиди на флуоресцеин и флуоресцеин метил естер: синтеза, ензимска хидролиза со биотнилирана β-галактозидаза и определување коефициент на транслациона дифузија

Моногликозидите на флуоресцеин (d-галактопиранозид (FMG) и d-глукопиранозид) и нивниот метил естер (MFMG) се подготвени од ацетобромоглукоза/галактоза и флуоресцеин метил естер со добри приноси.Извршени се експерименти со ензимска хидролиза (со употреба на биотинилирана β-галактозидаза) на дериватите на галакто и беа пресметани кинетичките параметри.За време на хидролизата е забележано зголемување на интензитетот на флуоресценција за 15-20 пати.Забележано е линеарно зголемување на флуоресценцијата за кратко време и ниска концентрација на супстратот, што ги прави овие соединенија корисни и чувствителни сонди за галактозидазите.Големината на вредноста на Михаелис-Ментен константата (Km) за MFMG е повисока од онаа на FMG што сугерира можна конформациска промена на флуорогениот супстрат.Км вредноста за биотинилираниот β-Gal со FMG е помала од онаа за природниот ензим.Оваа опсервација укажува на поголем афинитет на супстратот на биотинилираниот ензим во споредба со природниот ензим.Измерени се коефициентите на транслационата дифузија, и за флуорогените супстрати и за двата производи, со примена на флуоресценциска корелација спектроскопија.Преводните коефициенти на дифузија за флуорогени супстрати и производите на ензимска хидролиза се измерени дека се слични, во опсег од 3,5-4,5 × 10-10 m2 s-1.Така, подобрувањето или ретардацијата на ензимската кинетика поради разликата во транслациската подвижност на супстратот и производот не е толку видливо.